Plásmido CRISPR de Activación (h) Ndfip2: sc-405125-ACT

NDFIP2 (Ndfip2) codifica un adaptador de membrana endosomal que se une y activa ligasas E3 de ubiquitina tipo HECT de la familia NEDD4, ayudando a dirigir la carga ubiquitinada a través de la endocitosis y su degradación asociada al lisosoma. Mediante estas interacciones, Ndfip2 contribuye a la regulación dependiente de ubiquitina de la abundancia de proteínas de membrana, el tráfico vesicular y las salidas de señalización vinculadas a respuestas celulares al estrés. La expresión de NDFIP2 se ha estudiado en contextos inmunitarios y epiteliales, donde el control mediado por ubiquitina de la dinámica de receptores y transportadores puede moldear programas de inflamación, supervivencia y diferenciación. La desregulación del tráfico endolisosomal y de las redes de ligasas de ubiquitina es ampliamente relevante para la biología del cáncer y los mecanismos neuroinmunes, lo que respalda a NDFIP2 como un nodo útil para estudios centrados en vías.

Ndfip2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NDFIP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ndfip2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NDFIP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NDFIP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ndfip2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NDFIP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ndfip2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ndfip2 en células tumorales con expresión de NDFIP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.