NCOAT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429251

Descripción general

Mgea5 codifica NCOAT (también conocida como O‑GlcNAcasa), una enzima clave que elimina la β‑N‑acetilglucosamina (O‑GlcNAc) unida por enlace O de residuos de serina y treonina en proteínas nucleares y citoplasmáticas. Junto con la O‑GlcNAc transferasa, NCOAT regula el ciclo dinámico de O‑GlcNAc, que integra la detección de nutrientes con la señalización dependiente de fosforilación, e influye en la transcripción, la progresión del ciclo celular, la proteostasis y las respuestas al estrés. La actividad de NCOAT afecta a vías como la señalización de insulina/AKT, la regulación de la cromatina y el control de calidad proteico al modular los niveles de O‑GlcNAc en factores de transcripción, quinasas y proteínas del citoesqueleto. La desregulación de la homeostasis de O‑GlcNAc se ha vinculado a fenotipos metabólicos y asociados a neurodegeneración, lo que convierte a Mgea5 en una diana útil en modelos murinos de señalización y regulación epigenética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NCOAT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mgea5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mgea5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mgea5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NCOAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mgea5 para la investigación de la señalización de NCOAT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mgea5 críticos para la función de NCOAT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mgea5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NCOAT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NCOAT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mgea5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NCOAT (m) y el plásmido HDR NCOAT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mgea5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mgea5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.