Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NCoA-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401496-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NCoA-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NCoA-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und NCoA-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NCOA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NCoA-3: sc-5305
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NCoA-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401496-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NCoA-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401496-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCOA3 kodiert den nukleären Rezeptor-Koaktivator 3 (NCoA-3/SRC-3), einen transkriptionellen Koaktivator, der ligandaktivierte nukleäre Rezeptoren und andere Transkriptionsfaktoren mit Chromatin-Remodelling und der durch RNA-Polymerase II vermittelten Transkription koppelt. NCoA-3 integriert Signale von Steroidhormonrezeptoren sowie von wachstumsfaktorresponsiven Signalwegen, indem es Histon-Acetyltransferasen und weitere Koregulatoren rekrutiert, um Genprogramme zu steuern, die Proliferation, Differenzierung, Stoffwechsel und Stressantworten kontrollieren. Über diese Funktionen beeinflusst NCOA3 den Zellzyklusfortschritt und transkriptionelle Netzwerke, die mit endokriner Signalübertragung und onkogener transkriptioneller Umprogrammierung verknüpft sind. Eine veränderte NCOA3-Aktivität wurde mit einer Fehlregulation der Hormonrezeptor-Signalgebung und krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle macht.
NCoA-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NCOA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NCOA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NCOA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NCOA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.