Plásmido CRISPR de Activación (h) NCAM-L1: sc-401012-ACT

L1CAM codifica NCAM‑L1 (L1), una molécula de adhesión celular neuronal que media interacciones homofílicas y heterofílicas para regular el crecimiento de neuritas, la guía axonal, la migración neuronal y la plasticidad sináptica. A través de su acoplamiento a adaptadores del citoesqueleto y nodos de señalización, NCAM‑L1 influye en vías que controlan la dinámica de adhesión, la motilidad del cono de crecimiento y procesos vinculados a MAPK/ERK y PI3K que moldean el desarrollo de los circuitos neurales. En el sistema nervioso, la alteración de la expresión o la función de L1CAM se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y también se ha descrito en contextos de motilidad de células tumorales y comportamiento invasivo, lo que respalda su utilidad para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de la adhesión. Estas propiedades hacen de L1CAM un objetivo útil para desentrañar programas de interacción célula–célula y sus efectos transcripcionales y morfológicos aguas abajo.

NCAM-L1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de L1CAM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NCAM-L1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus L1CAM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional L1CAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NCAM-L1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo L1CAM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NCAM-L1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NCAM-L1 en células tumorales con expresión de L1CAM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.