Plasmide Double Nickase (h) NAT-10: sc-406713-NIC

NAT10 code pour NAT-10, une N‑acétyltransférase nucléolaire/cytoplasmique impliquée dans l’acétylation de l’ARN et des protéines, notamment dans la régulation de la N4‑acétylcytidine (ac4C) sur les ARNm, susceptible d’influencer la stabilité des transcrits et l’efficacité de la traduction. NAT‑10 participe à la biogenèse des ribosomes, à l’homéostasie du nucléole et à des processus liés au cycle cellulaire tels que les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress de réplication, en intégrant un contrôle de l’expression génique dépendant de l’acétylation aux programmes de croissance cellulaire. Dans la littérature, une activité ou une expression altérée de NAT10 a été associée à des phénotypes prolifératifs, à l’instabilité génomique et à une dérégulation du métabolisme de l’ARN observées dans divers contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier l’adaptation au stress et la protéostasie. Par conséquent, NAT10 est fréquemment étudié dans des voies reliant la modification de l’ARN, l’organisation de la chromatine et des programmes de type sénescence dans les cellules humaines.

NAT-10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NAT10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NAT10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NAT10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NAT10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.