NAT-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-408470-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NAT-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NAT-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und NAT-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NAT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NAT-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408470-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NAT-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408470-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane NAT1-Gen kodiert die Arylamin‑N‑Acetyltransferase 1 (NAT‑1), ein zytosolisches Xenobiotika‑metabolisierendes Phase‑II‑Enzym, das Acetylgruppen von Acetyl‑CoA auf Arylamin‑ und Hydrazin‑Substrate überträgt. NAT‑1 ist an N‑Acetylierungs‑ und O‑Acetylierungsreaktionen beteiligt, die die Bioaktivierung oder Entgiftung aromatischer Amine beeinflussen, und ist damit mit zellulären Reaktionen auf Umweltchemikalien sowie dem Arzneistoffmetabolismus verknüpft. Unterschiede in Expression und Aktivität von NAT1 wurden mit einer veränderten Anfälligkeit für chemikalieninduzierte DNA‑Schäden in Verbindung gebracht und im Kontext des Karzinogenmetabolismus untersucht, einschließlich der Biologie von Blasen‑ und kolorektalen Karzinomen. NAT1 ist zudem in umfassendere metabolische und redoxadaptive Programme eingebunden, die Proliferations‑ und Stressantwort‑Phänotypen in menschlichen Zellen prägen.
NAT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NAT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NAT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NAT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NAT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.