Plásmido CRISPR de Activación (h) Na⁺ CP type Xα: sc-407011-ACT

SCN10A codifica el canal de sodio dependiente de voltaje Na+ CP tipo Xα (Nav1.8), un canal resistente a la tetrodotoxina que favorece el inicio del potencial de acción y el disparo repetitivo en células excitables, en particular en neuronas sensoriales periféricas. Al modular la entrada de sodio y la dinámica de despolarización de la membrana, Nav1.8 contribuye a la excitabilidad neuronal, a la señalización evocada por estímulos y a programas génicos dependientes de la actividad vinculados a la remodelación de canales iónicos. La regulación de SCN10A se entrecruza con procesos más amplios de electrofisiología y señalización neuroinflamatoria que influyen en la nocicepción y la función del nervio periférico. La variación genética y la expresión desregulada de SCN10A se han asociado con fenotipos de dolor alterados y con rasgos de la electrofisiología cardíaca, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de trastornos relacionados con la excitabilidad.

Na+ CP type Xα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCN10A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Na+ CP type Xα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCN10A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCN10A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Na+ CP type Xα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCN10A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Na+ CP type Xα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Na+ CP type Xα en células tumorales con expresión de SCN10A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.