NARF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407124

Descripción general

NARF (factor de reconocimiento de prelamina A nuclear) codifica una proteína nuclear implicada en el procesamiento y el control de calidad de los precursores de la lamina A, lo que favorece una organización adecuada de la envoltura nuclear y la estabilidad del genoma. Al interactuar con la prelamina A y componentes relacionados de la lámina nuclear, NARF contribuye a vías que acoplan la proteostasis con la arquitectura nuclear, influyendo en la organización de la cromatina, las respuestas al daño del ADN y la progresión del ciclo celular. La alteración de la maduración de la lamina A y de la homeostasis de la lámina nuclear se asocia con un espectro de laminopatías y fenotipos progeroides, lo que convierte a NARF en un nodo útil para estudiar mecanismos de estrés nuclear. La función de NARF en humanos también es relevante para modelos que examinan cómo los cambios en la estructura nuclear afectan a los programas transcripcionales y a procesos celulares asociados al envejecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NARF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NARF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NARF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NARF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NARF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NARF para la investigación de la señalización de NARF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NARF críticos para la función de NARF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NARF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NARF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NARF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NARF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NARF (h) y el plásmido HDR NARF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NARF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NARF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.