Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos3 (h): sc-407364

Présentation

NANOS3 code la protéine de liaison à l’ARN Nanos3, un régulateur post‑transcriptionnel conservé, indispensable à la survie et au maintien des cellules germinales primordiales humaines. Nanos3 intervient dans les programmes de spécification de la lignée germinale en réprimant la traduction et en favorisant une dégradation sélective des ARNm, en s’intégrant à des voies qui contrôlent les décisions de destin cellulaire, la prolifération et l’apoptose au cours du développement précoce. Une activité dérégulée de NANOS3 a été associée à une altération du développement des cellules germinales et à des phénotypes liés à l’infertilité, et une expression modifiée a été rapportée dans certains types de tumeurs dérivées des cellules germinales. En tant que déterminant de la lignée germinale, NANOS3 constitue un point d’entrée utile pour disséquer les réseaux de régulation par l’ARN et les programmes transcriptionnels restreints à une lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NANOS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NANOS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NANOS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nanos3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NANOS3 pour l'étude de la signalisation de Nanos3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NANOS3 essentiels à la fonction de Nanos3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NANOS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nanos3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nanos3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NANOS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nanos3 plasmide HDR (h) et le Nanos3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NANOS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NANOS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.