Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nanos1: sc-404414-ACT

Le gène humain **NANOS1** code **Nanos1**, une protéine de liaison à l’ARN conservée au cours de l’évolution, qui régule l’expression génique post-transcriptionnelle dans les cellules germinales en modulant la stabilité des ARNm et leur traduction. **NANOS1** participe aux programmes de maintien et de différenciation de la lignée germinale via la répression de transcrits spécifiques, soutenant les décisions de destin cellulaire, la survie et le contrôle du cycle cellulaire. Une activité dérégulée de **NANOS1** a été associée à une altération de la spermatogenèse et à des phénotypes d’infertilité masculine, et une expression modifiée a été rapportée dans certains contextes tumoraux où des voies associées à la lignée germinale sont activées de manière ectopique. Ces propriétés font de **NANOS1** un nœud utile pour l’étude des réseaux de régulation de l’ARN, du contrôle génétique du développement et des mécanismes reliant des facteurs germinaux à la plasticité cellulaire.

Nanos1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NANOS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nanos1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NANOS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NANOS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nanos1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NANOS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nanos1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nanos1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NANOS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.