Particules Lentivirales d'Activation (h) Nanog: sc-418033-LAC

NANOG code le facteur de transcription homéobox Nanog, un régulateur central de la pluripotence qui maintient l’autorenouvellement et réprime l’engagement de lignée dans les états de cellules souches humaines. Nanog coopère avec les réseaux transcriptionnels fondamentaux impliquant OCT4/POU5F1 et SOX2 et interagit avec des voies de signalisation telles que TGF-β/SMAD, WNT/β-caténine et FGF/ERK afin d’équilibrer les programmes pluripotents et différenciés. Une expression dérégulée de NANOG est fréquemment utilisée comme indicateur moléculaire de la « stemness » et de la plasticité cellulaire, et les circuits transcriptionnels modifiés dépendant de NANOG sont étudiés dans les anomalies du développement ainsi qu’en biologie tumorale, où des phénotypes de type cellule souche sont impliqués dans la progression et les mécanismes de résistance. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, Nanog influence l’accessibilité de la chromatine et l’activité des enhancers transcriptionnels, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques des réseaux de régulation génique.

Les particules d'activation lentivirales Nanog (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NANOG dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nanog (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NANOG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nanog. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NANOG ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.