Nanog CRISPR Activation Plasmid (m): sc-428155-ACT

Maus-Nanog kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der als zentraler Regulator von Pluripotenz und Selbsterneuerung im präimplantativen Embryo und in embryonalen Stammzellen dient. NANOG kooperiert mit OCT4 und SOX2, um ein Kernnetzwerk der Transkriptionsregulation aufzubauen, und interagiert zugleich mit Chromatin-Remodelling- sowie epigenetischen Kontrollwegen, die die Lineage-Festlegung und die Repression von Differenzierungsprogrammen steuern. Eine veränderte NANOG-Expression wird häufig als Marker stammzellähnlicher Zellzustände verwendet und ist in krankheitsrelevanten Modellen an Mechanismen beteiligt, die aberrante Selbsterneuerung, epithelial-mesenchymale Transition und eine Resistenz gegenüber Differenzierungssignalen unterstützen. Diese Eigenschaften machen Nanog zu einem wichtigen Ziel für die Untersuchung entwicklungsbiologischer genregulatorischer Netzwerke, Zellschicksalsübergänge und der durch Transkriptionsfaktoren getriebenen Reprogrammierung.

Nanog Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nanog-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nanog Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nanog-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nanog-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nanog-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nanog-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nanog-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nanog-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nanog-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.