NALP9A CRISPR Activation Plasmid (m): sc-433227-ACT

Das Mausgen **Nlrp9a** kodiert **NALP9A**, ein Mitglied der Familie der NOD-like-Rezeptoren (NLR), die an der angeborenen Immunerkennung und an inflammasombezogener Signalübertragung beteiligt ist. Wie andere NLR-Proteine mit Pyrin-Domäne ist NALP9A mit Signalwegen assoziiert, die die Caspase-Aktivierung, die Prozessierung inflammatorischer Zytokine und stressresponsive Programme des Zelltods regulieren. Die Expression von **Nlrp9a** wurde mit epithelialen und reproduktiven Geweben in Verbindung gebracht, was auf Rollen in der barrierea ss oziierten Immunüberwachung und in entwicklungsabhängiger Entzündung hindeutet. Eine Fehlregulation der NLR-vermittelten Signalgebung ist relevant für Untersuchungen zu Autoinflammation und mukosaler Immunhomöostase und bietet einen Rahmen, um zu analysieren, wie **Nlrp9a** entzündliche Phänotypen in Mausmodellen beeinflusst.

NALP9A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nlrp9a-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NALP9A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nlrp9a-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nlrp9a-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NALP9A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nlrp9a-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NALP9A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NALP9A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nlrp9a-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.