NALP7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403262-ACT

NLRP7 kodiert NALP7, einen zytosolischen NOD-like-Rezeptor, der an der angeborenen Immunerkennung und der Regulation inflammasom-assoziierter Signalwege beteiligt ist. Über Interaktionen, die den Aufbau des Inflammasoms beeinflussen, kann NALP7 die nachgeschaltete Caspase-1-Aktivität und die Prozessierung von Zytokinen der IL-1-Familie modulieren und ist damit mit Entzündungs- und Stressantwort-Signalwegen verknüpft. Die Expression von NLRP7 und Sequenzvariationen wurden mit reproduktions- und plazentabezogener Pathobiologie in Verbindung gebracht, darunter die rezidivierende Blasenmole (hydatidiforme Mole) und verwandte Störungen der frühen Embryonalentwicklung. Diese Eigenschaften machen NLRP7 zu einem nützlichen Ziel, um die Regulation der angeborenen Immunantwort in der Trophoblastenbiologie, in makrophagenähnlichen Zelllinien und in weiteren Kontexten zu untersuchen, in denen die Feinabstimmung des Inflammasoms die zelluläre Homöostase beeinflusst.

NALP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NLRP7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NALP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NLRP7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NLRP7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NALP7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NLRP7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NALP7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NALP7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NLRP7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.