NALP6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404548-ACT

NLRP6 (NALP6) ist ein zytosolischer NOD-like-Rezeptor, der als Mustererkennungs‑Sensor und als Gerüstprotein für den Aufbau des Inflammasoms fungiert und mikrobielle sowie Gefahrensignale mit angeborenen, transkriptionellen Immunprogrammen verknüpft. Er moduliert die Aktivierung von Caspase‑1, die Prozessierung von Zytokinen der IL‑1‑Familie sowie die nachgeschaltete NF‑κB‑ und MAPK‑Signalgebung und beeinflusst damit die Integrität der epithelialen Barriere und die Homöostase der mukosalen Immunabwehr. Die NALP6‑Aktivität wird mit der Regulation von Wirt‑Mikrobiom‑Interaktionen und Entzündungsreaktionen in gastrointestinalen Geweben in Verbindung gebracht; eine Dysregulation wird im Kontext chronischer Entzündung und tumorassoziierter Immunmikroumgebungen untersucht. Daher wird NLRP6 häufig in Signalwegen untersucht, die Pyroptose, Zytokinreifung und den angeborenen immunologischen Crosstalk mit epithelialen und stromalen Zellen steuern.

NALP6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NLRP6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NALP6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NLRP6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NLRP6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NALP6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NLRP6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NALP6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NALP6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NLRP6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.