NALP6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404548-ACT

NLRP6 (NALP6) è un recettore citosolico di tipo NOD che funge da sensore di riconoscimento di pattern e da piattaforma (scaffold) per l’assemblaggio dell’inflammasoma, collegando segnali microbici e di pericolo ai programmi trascrizionali dell’immunità innata. Modula l’attivazione della caspasi-1, la maturazione delle citochine della famiglia dell’IL-1 e la segnalazione a valle di NF-κB e MAPK, influenzando così l’integrità della barriera epiteliale e l’omeostasi immunitaria della mucosa. L’attività di NALP6 è stata collegata alla regolazione delle interazioni ospite–microbioma e delle risposte infiammatorie nei tessuti gastrointestinali, e la sua disregolazione è studiata nel contesto dell’infiammazione cronica e dei microambienti immunitari associati ai tumori. Di conseguenza, NLRP6 è comunemente investigato nei percorsi che controllano la piroptosi, la maturazione delle citochine e il crosstalk dell’immunità innata con cellule epiteliali e stromali.

NALP6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NLRP6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NALP6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NLRP6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NLRP6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NALP6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NLRP6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NALP6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NALP6 nelle cellule tumorali con espressione di NLRP6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.