NALP1A CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431476-ACT

Das murine Nlrp1a kodiert NALP1A, einen zytosolischen NOD-like-Rezeptor, der als Inflammasom-Sensor fungiert und pathogen- oder gefahrassoziierte Signale mit der Aktivierung der angeborenen Immunantwort verknüpft. Nach Aktivierung fördert NALP1A den Zusammenbau von Inflammasom-Komplexen, die die Aktivierung von Caspase-1 antreiben, was zur Prozessierung von Zytokinen der IL-1-Familie und zu entzündlichen Zelltodprogrammen wie der Pyroptose führt. Dieser Signalweg überschneidet sich mit dem NF-κB-Priming, zellulären Stressantworten und der antimikrobiellen Abwehr und prägt dadurch die Immun-Signalübertragung in myeloiden und epithelialen Zellen. Eine fehlregulierte Inflammasom-Aktivität der NLRP1-Familie wird mit aberranten Entzündungsphänotypen und immunvermittelten Gewebeschäden in Verbindung gebracht, wodurch Nlrp1a ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zu steriler Entzündung und Wirt–Pathogen-Interaktionen in Mausmodellen ist.

NALP1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nlrp1a-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NALP1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nlrp1a-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nlrp1a-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NALP1A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nlrp1a-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NALP1A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NALP1A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nlrp1a-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.