Plásmido Doble Nickase (m) NaDC-1: sc-422975-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NaDC-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NaDC-1 (m) y el plásmido de doble nickasa NaDC-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Slc13a2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NaDC-1 | sc-422975-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc13a2 codifica el cotransportador de dicarboxilatos dependiente de sodio NaDC-1, un transportador de la membrana apical que acopla el gradiente de Na+ a la captación de intermediarios del ciclo de Krebs como citrato, succinato y α-cetoglutarato. En el túbulo proximal renal del ratón, NaDC-1 contribuye a la reabsorción de citrato y, con ello, influye en los niveles de citrato urinario, la homeostasis ácido-base y el manejo de sales de calcio. Al regular la disponibilidad intracelular de dicarboxilatos, NaDC-1 puede afectar la anaplerosis mitocondrial y el flujo de redes metabólicas conectadas con el ciclo del TCA. Las alteraciones en la función de Slc13a2/NaDC-1 se han vinculado con fenotipos relevantes para la formación de cálculos renales, la fisiología del transporte tubular renal y adaptaciones metabólicas estudiadas en nefrología y en modelos de metabolismo de sistemas.
NaDC-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Slc13a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Slc13a2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Slc13a2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Slc13a2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.