NACA1CRISPR激活质粒(h): sc-408139-ACT

人类 NACA 基因编码新生多肽相关复合体α亚基（nascent polypeptide–associated complex subunit alpha，NACA1）。NACA1 是一种与核糖体相关的分子伴侣，能够结合正在延伸的新生多肽链，帮助协调共翻译折叠、靶向运输以及质量控制。NACA1 与其伴侣亚基协同作用，在核糖体出口通道处调控新生肽链的相互作用，从而影响蛋白质生物发生与蛋白稳态（proteostasis）通路，这些通路与内质网靶向以及应激适应性反应相关。通过塑造有效翻译与错误折叠蛋白处理之间的平衡，NACA1 与翻译调控发生改变的细胞状态密切相关，包括增殖性程序和应激信号传导。已有研究在多种疾病相关背景中观察到 NACA/NACA1 表达失衡，这促使人们从机制层面研究共翻译调控如何影响细胞命运与转录网络。

NACA1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NACA的表达。

NACA1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NACA基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NACA转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NACA1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NACA位点，并能够研究内源性位点上依赖于NACA1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NACA表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NACA1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。