Partículas Lentivirales de Activación (h) N4BP2: sc-412585-LAC

N4BP2 (proteína 2 de unión a NEDD4) codifica una gran proteína intracelular implicada en la señalización dependiente de ubiquitina mediante interacciones con ligasas de ubiquitina E3 de la familia NEDD4. Las funciones descritas relacionan a N4BP2 con la regulación del recambio y el tráfico de proteínas, con efectos posteriores sobre la homeostasis celular, las respuestas al estrés y las redes de transducción de señales que dependen de una ubiquitinación controlada. En contextos inmunitarios y hematopoyéticos, la expresión de N4BP2 se ha asociado con la modulación de la señalización inflamatoria y de procesos reguladores de ARN/proteínas, lo que sugiere funciones en la configuración de las transiciones de estado celular. Los componentes de la vía de la ubiquitina desregulados, incluidos los factores que interactúan con NEDD4 como N4BP2, se examinan con frecuencia por sus asociaciones con la biología del cáncer, la neurobiología y los mecanismos de enfermedades relacionadas con el sistema inmunitario.

Las partículas de activación lentiviral N4BP2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de N4BP2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral N4BP2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción N4BP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de N4BP2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo N4BP2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.