Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) N-SMase2: sc-401937-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) N-SMase2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide N-SMase2 Double Nickase (h) et le plasmide N-SMase2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SMPD3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: N-SMase2 Antibody (G-6): sc-166637
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) N-SMase2 | sc-401937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) N-SMase2 | sc-401937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **SMPD3** code la sphingomyélinase neutre 2 (**N‑SMase2**), une enzyme associée aux membranes qui hydrolyse la sphingomyéline pour produire du céramide et de la phosphocholine. En contrôlant la production de céramide à la membrane plasmique et au niveau de l’appareil de Golgi, N‑SMase2 régule le métabolisme des sphingolipides, l’organisation des microdomaines membranaires et la transduction du signal en aval des stimuli de stress cellulaire et des signaux inflammatoires. L’activité de SMPD3 a été reliée à des voies influençant l’apoptose, le trafic vésiculaire et la biogenèse des vésicules extracellulaires, avec des effets en aval sur l’homéostasie lipidique et la régulation de l’état cellulaire. Un dérèglement de la signalisation du céramide et une altération de la fonction SMPD3/N‑SMase2 sont impliqués dans des processus pertinents pour la maladie, notamment en neurobiologie, dans les dysfonctionnements métaboliques, l’inflammation et des phénotypes associés au cancer.
N-SMase2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMPD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMPD3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMPD3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMPD3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.