Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
N-Ras Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421960
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- N-Ras El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico N-Ras, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: N-Ras Anticuerpo (F155): sc-31
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
N-Ras Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421960 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Nras de ratón codifica N-Ras, una pequeña GTPasa asociada a la membrana que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para transducir señales provenientes de receptores tirosina cinasa y otras señales aguas arriba. N-Ras activada activa las principales vías efectoras de Ras, incluidas RAF–MEK–ERK (MAPK) y PI3K–AKT, coordinando la proliferación, la diferenciación, la dinámica del citoesqueleto y la supervivencia. Un control estricto de la actividad de N-Ras es esencial para la señalización hematopoyética y del desarrollo normales, y la alteración del flujo de las vías de Ras es ampliamente relevante para la transformación oncogénica y las respuestas del microambiente inflamatorio. Por lo tanto, Nras sirve como un nodo clave para analizar la reconfiguración de redes impulsada por Ras y el crosstalk (intercomunicación) entre vías en modelos celulares y de enfermedad en ratón.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO N-Ras (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nras en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nras junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nras tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína N-Ras.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nras para la investigación de la señalización de N-Ras, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nras críticos para la función de N-Ras
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nras para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido N-Ras CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido N-Ras CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nras. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR N-Ras (m) y el plásmido HDR N-Ras (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nras para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nras definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.