Plásmido CRISPR de Activación (h) N-Myc: sc-400253-ACT

MYCN codifica el factor de transcripción humano N-Myc, una proteína de tipo hélice‑bucle‑hélice básica con motivo cremallera de leucina que heterodimeriza con MAX para unirse a elementos reguladores E-box y coordinar amplios programas de expresión génica. N-Myc contribuye a regular la progresión del ciclo celular, la biogénesis de ribosomas, el metabolismo, las respuestas al estrés por replicación del ADN y el estado de diferenciación mediante su integración con la actividad de la red MYC/MAX y el reclutamiento de cofactores asociados a la cromatina. La desregulación de la expresión de MYCN se asocia con una capacidad proliferativa y programas de linaje alterados en múltiples contextos tumorales, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar los circuitos transcripcionales oncogénicos. Sus efectos aguas abajo sobre la transcripción mediada por la ARN polimerasa II, la accesibilidad de la cromatina y las vías de señalización de factores de crecimiento proporcionan lecturas medibles para la investigación mecanística.

N-Myc El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYCN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

N-Myc El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYCN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYCN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de N-Myc. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYCN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de N-Myc en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía N-Myc en células tumorales con expresión de MYCN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.