Myosin XVIIIa Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436163

Descripción general

Myo18a codifica la miosina XVIIIa, un motor/andamiaje no convencional basado en actina que se localiza en redes dinámicas de actina y contribuye a la organización del citoesqueleto, la remodelación de la membrana y el control de la forma celular. La miosina XVIIIa se ha relacionado con procesos como la migración celular, la adhesión y el tráfico intracelular mediante la coordinación del ensamblaje de filamentos de actina y de estructuras contráctiles. En sistemas murinos, la función de Myo18a se estudia comúnmente en el contexto de la morfogénesis tisular, la motilidad de neuronas y células inmunes, y la regulación de vías de mecanotransducción. La desregulación de la arquitectura actina–miosina y de la señalización asociada puede influir en fenotipos relevantes para anomalías del desarrollo y cambios asociados al cáncer en la biología de la invasión y la metástasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin XVIIIa (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Myo18a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Myo18a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Myo18a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin XVIIIa.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Myo18a para la investigación de la señalización de Myosin XVIIIa, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Myo18a críticos para la función de Myosin XVIIIa
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Myo18a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Myo18a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin XVIIIa (m) y el plásmido HDR Myosin XVIIIa (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Myo18a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Myo18a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.