Myosin VIIB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421802

Panoramica

Myo7b codifica la miosina VIIB, una proteina motoria basata sull’actina arricchita nelle cellule epiteliali polarizzate, dove contribuisce al rimodellamento del citoscheletro, al traffico apicale e al mantenimento dell’architettura dei microvilli. Attraverso interazioni con i filamenti di actina e complessi associati alla membrana, la miosina VIIB sostiene l’assemblaggio dell’orletto a spazzola e l’organizzazione delle proteine di membrana coinvolte nell’assorbimento e nella funzione di barriera. L’alterazione dei processi dipendenti da MYO7B è rilevante per la disfunzione epiteliale e per una omeostasi intestinale compromessa, rendendolo un bersaglio utile per studiare la polarità, la dinamica delle giunzioni cellulari e la specializzazione della superficie. I modelli murini di Myo7b aiutano a indagare vie conservative che collegano l’attività dei motori dell’actina alla morfogenesi epiteliale e al mantenimento dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin VIIB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myo7b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myo7b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myo7b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myosin VIIB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myo7b per lo studio della segnalazione di Myosin VIIB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myo7b critici per la funzione di Myosin VIIB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myo7b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myo7b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myosin VIIB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Myosin VIIB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myo7b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myo7b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.