Plásmido CRISPR de Activación (h) Myosin VIIB: sc-409183-ACT

El gen humano **MYO7B** codifica la **miosina VIIB**, una proteína motora basada en actina que contribuye a la organización del citoesqueleto y a los procesos de transporte intracelular vinculados con la polaridad celular y el mantenimiento de dominios especializados de la membrana. Como miembro de la familia de miosinas no convencionales, se la asocia con la dinámica de los filamentos de actina, el tráfico vesicular y eventos de señalización mediados por complejos de andamiaje que moldean la arquitectura epitelial. La desregulación del transporte dependiente de actina y de las vías de polaridad se estudia con frecuencia en contextos como defectos de la función de barrera y alteraciones de la organización tisular relevantes para los sistemas gastrointestinal y sensorial. Por lo tanto, la modulación de **MYO7B** resulta útil para analizar cómo los motores de actina coordinan el tráfico, los complejos de adhesión y la remodelación de uniones en células humanas.

Myosin VIIB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYO7B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myosin VIIB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYO7B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYO7B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myosin VIIB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYO7B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myosin VIIB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myosin VIIB en células tumorales con expresión de MYO7B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.