Myosin VI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401815

Descripción general

MYO6 codifica la miosina VI humana, un motor no convencional basado en actina que se desplaza de forma única hacia el extremo menos de los filamentos de actina para sostener el tráfico intracelular y la dinámica de membranas. La miosina VI participa en la endocitosis mediada por clatrina, la clasificación endosomal, el transporte entre el Golgi y la vía secretora, y la organización de estructuras ricas en actina como las microvellosidades y los estereocilios. A través de interacciones con proteínas adaptadoras y con la carga, contribuye a la migración celular, la adhesión y procesos mecanosensoriales, vinculando la remodelación del citoesqueleto con el transporte vesicular. La desregulación de MYO6 se ha asociado con fenotipos relacionados con la audición y con una organización epitelial alterada, lo que lo hace relevante para estudios de biología sensorial y de defectos de tráfico impulsados por el citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin VI (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYO6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYO6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYO6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin VI.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYO6 para la investigación de la señalización de Myosin VI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MYO6 críticos para la función de Myosin VI
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYO6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin VI CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myosin VI CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYO6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin VI (h) y el plásmido HDR Myosin VI (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYO6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYO6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.