Myosin IXa Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407473

Descripción general

MYO9A codifica la miosina IXa, una proteína motora no convencional basada en actina que también contiene un dominio activador de la actividad GTPasa de Rho (RhoGAP), lo que vincula la dinámica del citoesqueleto con la señalización de pequeñas GTPasas. Mediante la regulación de la remodelación de actina, la formación de protrusiones de membrana y la adhesión celular, la miosina IXa contribuye a la polaridad celular y a la migración dirigida, y puede influir en vías dependientes de RhoA que controlan la contractilidad y la organización de las uniones. Estas funciones sitúan a MYO9A como un nodo mecanístico en procesos como la morfogénesis epitelial, el crecimiento de neuritas y el tráfico intracelular, donde se requiere una actividad motora coordinada y señalización de Rho. La desregulación del control del citoesqueleto y de la señalización de la vía de Rho está implicada en diversas patologías humanas, lo que hace de MYO9A una diana relevante para estudiar cambios asociados a enfermedad en la motilidad, la función de barrera y la señalización morfodinámica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin IXa (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYO9A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYO9A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYO9A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin IXa.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYO9A para la investigación de la señalización de Myosin IXa, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MYO9A críticos para la función de Myosin IXa
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYO9A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin IXa CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myosin IXa CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYO9A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin IXa (h) y el plásmido HDR Myosin IXa (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYO9A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYO9A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.