Plásmido CRISPR de Activación (h) Myosin If: sc-403977-ACT

MYO1F codifica la miosina If, una proteína motora dependiente de actina enriquecida en células hematopoyéticas que favorece la dinámica de membrana, la remodelación de la actina cortical y la generación de fuerza durante la adhesión y la migración. La miosina If contribuye al tráfico vesicular, a la formación de la copa fagocítica y a la organización del citoesqueleto asociada a integrinas, conectando la motilidad impulsada por ATP con la polaridad y la señalización de las células inmunitarias. La alteración de la expresión o la función de MYO1F se ha asociado con desregulación de la motilidad leucocitaria y de las respuestas inflamatorias, lo que la hace relevante para estudios de homeostasis inmunitaria y de mecanismos de enfermedad mediada por el sistema inmunitario. Su actividad se integra con vías reguladoras de la actina que coordinan la endocitosis, la quimiotaxis y la arquitectura de la sinapsis inmunitaria.

Myosin If El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYO1F sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myosin If El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYO1F en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYO1F, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myosin If. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYO1F y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myosin If en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myosin If en células tumorales con expresión de MYO1F silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.