Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ib (h): sc-403530

Présentation

MYO1B code la myosine Ib, un moteur associé à la membrane et dépendant de l’actine, qui contribue à la tension corticale et au remodelage dynamique de la membrane plasmique. La myosine Ib participe au trafic endocytaire, à la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et à l’organisation du réseau d’actine en couplant la génération de force à des membranes riches en phosphoinositides. Par ces fonctions, elle influence la polarité cellulaire, l’adhésion et la migration, des processus qui s’articulent avec des voies de signalisation régulant la dynamique du cytosquelette et le transport vésiculaire. Des altérations de l’expression ou de l’activité de MYO1B ont été étudiées dans des contextes de comportement cellulaire invasif et de désorganisation de l’architecture épithéliale, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques du remodelage du cortex d’actine associé aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ib (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin Ib.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO1B pour l'étude de la signalisation de Myosin Ib, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO1B essentiels à la fonction de Myosin Ib
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin Ib plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin Ib plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin Ib plasmide HDR (h) et le Myosin Ib (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.