Myosin Ia Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436599

Descripción general

Myo1a codifica la miosina Ia, un motor dependiente de actina enriquecido en células epiteliales polarizadas, donde sostiene la estructura de las microvellosidades y el acoplamiento membrana–citoesqueleto en la superficie apical. La miosina Ia contribuye a la dinámica de los filamentos de actina, a la tensión de membrana y a los procesos de tráfico vesicular que ayudan a mantener la organización del borde en cepillo y la función de barrera epitelial. A través de interacciones con la red cortical de actina, influye en vías que regulan la polaridad celular, la absorción y las respuestas mecánicas en el epitelio intestinal. Las alteraciones en la función o la expresión de MYO1A se han asociado con la desregulación epitelial y se han investigado en la patobiología gastrointestinal, incluidos contextos de deterioro de la barrera y tumorigenesis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin Ia (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Myo1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Myo1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Myo1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin Ia.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Myo1a para la investigación de la señalización de Myosin Ia, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Myo1a críticos para la función de Myosin Ia
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Myo1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Myo1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin Ia (m) y el plásmido HDR Myosin Ia (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Myo1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Myo1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.