Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404995

Übersicht

MYO1A kodiert Myosin Ia, ein einköpfiges, aktinabhängiges Motorprotein, das an der apikalen Membran lokalisiert und zur Struktur der Mikrovilli sowie zur Membrandynamik in polarisierten Epithelien beiträgt. Myosin Ia koppelt die Interaktionen mit Aktinfilamenten an Membrantransport und -spannung und unterstützt damit Prozesse wie Vesikeltransport, Organisation des Bürstensaums und die Aufrechterhaltung der Zellpolarität. Über diese Funktionen der Zytoskelett- und Membranremodellierung beeinflusst MYO1A die Integrität der epithelialen Barriere und Differenzierungsprogramme. Eine veränderte MYO1A-Expression oder -Funktion wurde mit epithelialen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht und im Kontext gastrointestinaler sowie epithelial abgeleiteter Erkrankungen untersucht.

Das Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYO1A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYO1A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYO1A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin Ia-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYO1A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin Ia-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYO1A-Exone abzielen, die für die Myosin Ia-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYO1A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myosin Ia CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYO1A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin Ia HDR-Plasmid (h) und Myosin Ia HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYO1A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYO1A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.