Plásmido CRISPR de Activación (h) myomesin-2: sc-403165-ACT

MYOM2 codifica la miomesina-2, un componente estructural principal de la banda M sarcomérica que entrecruza los filamentos gruesos y estabiliza la arquitectura de las miofibrillas en el músculo estriado. Al organizar la alineación de los filamentos de miosina y contribuir a la elasticidad pasiva, la miomesina-2 favorece una transmisión eficiente de la fuerza durante la contracción y la adaptación al estrés mecánico. La expresión de MYOM2 y la integridad de la banda M se coordinan con los programas de ensamblaje del sarcómero y con procesos de mecanotransducción que determinan la función de los cardiomiocitos y del músculo esquelético. Las alteraciones del andamiaje sarcomérico y la desregulación de MYOM2 se han asociado con cardiomiopatías hereditarias y defectos miofibrilares, por lo que resulta relevante para estudiar los mecanismos de enfermedad muscular.

myomesin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYOM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

myomesin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYOM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYOM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de myomesin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYOM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de myomesin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía myomesin-2 en células tumorales con expresión de MYOM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.