Plásmido CRISPR de Activación (r) MYH9: sc-437291-ACT

MYH9 codifica la miosina IIA no muscular, una proteína motora basada en actina que impulsa la contractilidad celular, la citocinesis y la remodelación dinámica del citoesqueleto cortical en células de rata. Mediante la regulación de la tensión actomiosina, MYH9 influye en el recambio de las adhesiones focales, la polaridad celular y las vías de mecanotransducción que coordinan la migración y la organización tisular. La función de MYH9 se interseca con la señalización RhoA/ROCK y con redes citoesqueléticas vinculadas a integrinas que controlan el tráfico de membrana, procesos similares a la fagocitosis y el mantenimiento de las barreras epiteliales y endoteliales. La alteración de la actividad de MYH9 se asocia con defectos en la producción de plaquetas y la hemostasia, fenotipos renales y auditivos, y una desregulación citoesquelética más amplia relevante para estudios de inflamación, fibrosis y modelos de invasión de células cancerosas.

MYH9 El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH9 El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH9 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.