Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH7B: sc-400621-ACT

MYH7B codifica un miembro de la familia de cadenas pesadas de miosina sarcomérica, con funciones en la actividad motora basada en actina y en la organización de la maquinaria contráctil en linajes de músculo estriado. Como parte de la generación de fuerza dependiente de miosina, MYH7B está vinculado funcionalmente a la dinámica del citoesqueleto, a la transducción mecanocímica dependiente de ATP y a vías que mantienen la integridad de las miofibrillas y la diferenciación de las células musculares. La desregulación de los programas génicos de cadenas pesadas de miosina se estudia con frecuencia en el contexto de la remodelación de cardiomiocitos y del músculo esquelético, donde la expresión alterada de genes contráctiles contribuye a fenotipos patológicos. Por ello, MYH7B constituye una diana útil para investigar el control transcripcional de componentes del sarcómero, redes génicas específicas del músculo y procesos de remodelación sensibles al estrés en modelos celulares humanos.

MYH7B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH7B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH7B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH7B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH7B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH7B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH7B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH7B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH7B en células tumorales con expresión de MYH7B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.