Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH6: sc-400351-ACT

MYH6 codifica la cadena pesada de miosina alfa cardíaca, un componente esencial del filamento grueso de miosina II que impulsa el acortamiento del sarcómero mediante el ciclo de puentes cruzados actina–miosina dependiente de ATP. En el miocardio humano, MYH6 contribuye a la cinética contráctil, a la generación de fuerza y a un acoplamiento excitación–contracción coordinado a través de interacciones con proteínas sarcoméricas reguladoras y estructurales. La expresión de MYH6 y el equilibrio de sus isoformas están estrechamente regulados durante el desarrollo y en respuesta al estrés hemodinámico, lo que la vincula con vías que gobiernan la miofibrilogénesis y el remodelado cardíaco. La variación genética o la desregulación de MYH6 se ha asociado con cardiomiopatías hereditarias y fenotipos cardíacos congénitos, por lo que es un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de la función cardíaca.

MYH6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH6 en células tumorales con expresión de MYH6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.