Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH11: sc-400695-ACT

MYH11 code la chaîne lourde 11 de la myosine des muscles lisses, un composant central de l’appareil contractile actomyosine qui fournit la force nécessaire à la génération de tension et au remodelage du cytosquelette dans les cellules musculaires lisses vasculaires et viscérales. Par son interaction avec les filaments d’actine, dépendante de l’ATP, MYH11 soutient la contractilité, le contrôle de la forme cellulaire et des programmes de mécanotransduction qui s’articulent avec la signalisation calcique, la dynamique de l’actine médiée par RhoA/ROCK et le renouvellement des adhésions focales. Une altération de l’expression de MYH11 ou de son intégrité structurelle peut perturber la différenciation des muscles lisses et la fonction contractile, contribuant à l’instabilité de la paroi vasculaire et à une biomécanique tissulaire altérée. MYH11 est également impliqué dans des fusions géniques oncogéniques dans les hémopathies myéloïdes, ce qui souligne son intérêt pour l’étude d’une régulation transcriptionnelle aberrante et de phénotypes spécifiques de lignée.

MYH11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH11 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.