Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYG1 (h): sc-405754

Présentation

C12orf10 code MYG1, une nucléase conservée impliquée dans le métabolisme de l’ARN et le maintien du génome, dont l’activité a été décrite vis-à-vis de substrats ARN ainsi que des rôles dans le traitement des ARN mitochondriaux et nucléaires. MYG1 a été associée à la régulation de l’expression des gènes mitochondriaux et à l’homéostasie énergétique cellulaire, ce qui la relie à des voies coordonnant le renouvellement des ARN, la phosphorylation oxydative et des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Une perturbation de la fonction de MYG1 peut altérer le contrôle qualité des ARN et la fonction des organites, des processus fréquemment associés, dans des contextes pertinents pour la maladie, à une prolifération modifiée, à un déséquilibre de la protéostasie et à une signalisation inflammatoire. Ces caractéristiques font de MYG1 une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de maturation des ARN et de la communication mitochondrie–noyau dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C12orf10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C12orf10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C12orf10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C12orf10 pour l'étude de la signalisation de MYG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C12orf10 essentiels à la fonction de MYG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C12orf10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C12orf10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYG1 plasmide HDR (h) et le MYG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C12orf10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C12orf10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.