Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myf-6: sc-401899-ACT

MYF6 code pour Myf-6 (également appelé MRF4), un facteur de transcription à domaine basique hélice–boucle–hélice, qui agit au sein du réseau des facteurs régulateurs myogéniques contrôlant l’engagement de la lignée du muscle squelettique et la différenciation terminale. Myf-6 coordonne des programmes transcriptionnels liés à l’assemblage myofibrillaire, à la maturation des fibres musculaires et au maintien de l’identité musculaire, via des interactions avec des éléments régulateurs de type E-box et une coopération fonctionnelle avec d’autres facteurs myogéniques. Son activité s’intègre à des voies régissant la myogenèse et le remodelage musculaire, notamment des circuits transcriptionnels en aval de signaux développementaux et la régulation épigénétique de l’expression des gènes spécifiques du muscle. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel myogénique impliquant MYF6 est pertinente pour l’étude du développement neuromusculaire, des dynamiques de dégénérescence/régénération musculaires et de contextes tumoraux présentant des programmes de différenciation myogénique aberrants, tels que le rhabdomyosarcome.

Myf-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myf-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myf-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myf-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myf-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.