MYBPC3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401409-ACT

MYBPC3 codifica a proteína C de ligação à miosina cardíaca, uma proteína sarcomérica associada ao filamento espesso que modula o ciclo de pontes cruzadas actina–miosina e contribui para a cinética contrátil no músculo estriado. Por meio de uma regulação dependente de fosforilação e de interações na banda A/zona C, MYBPC3 influencia o manuseio de cálcio, a montagem miofibrilar e vias de sinalização mecânica que moldam a função dos cardiomiócitos. Alterações genéticas e de expressão em MYBPC3 estão fortemente associadas a cardiomiopatias hereditárias, especialmente a cardiomiopatia hipertrófica, e são usadas para modelar disfunção do sarcômero e remodelamento maladaptativo. Como regulador estrutural específico do músculo, MYBPC3 é frequentemente estudado em cardiomiócitos derivados de iPSC para conectar a biologia do sarcômero com respostas ao estresse e adaptação energética.

MYBPC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYBPC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYBPC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYBPC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYBPC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYBPC3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYBPC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYBPC3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYBPC3 em células tumorais com expressão de MYBPC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.