Plásmido CRISPR de Activación (h) MYBPC2: sc-407591-ACT

MYBPC2 codifica la proteína C de unión a la miosina, tipo rápido, una proteína sarcomérica asociada al filamento grueso que modula el ciclo de los puentes cruzados actomiosina y estabiliza la organización de los filamentos de miosina en el músculo estriado. A través de interacciones con la cadena pesada de miosina y con titina, MYBPC2 contribuye al rendimiento contráctil y al ensamblaje del sarcómero, e influye en la regulación sensible al calcio del desarrollo de la fuerza. La expresión alterada o la desregulación de genes estructurales sarcoméricos, incluido MYBPC2, es relevante para estudios de remodelación miofibrilar y de fenotipos de rendimiento muscular. En la investigación biomédica humana, MYBPC2 se analiza con frecuencia en el contexto del desarrollo muscular, las respuestas al estrés mecánico y las vías que controlan la integridad del sarcómero.

MYBPC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYBPC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYBPC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYBPC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYBPC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYBPC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYBPC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYBPC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYBPC2 en células tumorales con expresión de MYBPC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.