Plasmide CRISPR d'Activation (m) MYBBP1A: sc-422090-ACT

Mybbp1a code la protéine murine MYBBP1A (MYB-binding protein 1A), un corégulateur transcriptionnel principalement nucléolaire qui intègre des signaux associés à la chromatine avec la biogenèse des ribosomes et le contrôle du cycle cellulaire. Il a été rapporté que MYBBP1A module des programmes transcriptionnels liés à l’activité de l’ARN polymérase I, aux réponses au stress nucléolaire et à la régulation métabolique, influençant ainsi la croissance et la prolifération cellulaires. Par ses interactions avec des facteurs de transcription et des complexes de modification de la chromatine, MYBBP1A peut affecter des voies qui gouvernent la différenciation et l’expression génique adaptative en contexte de stress. Une expression ou une fonction altérée de MYBBP1A est associée à une prolifération dérégulée et à des phénotypes de maintenance du génome, pertinents pour la biologie du cancer et d’autres contextes où la fonction nucléolaire et l’homéostasie transcriptionnelle sont perturbées.

MYBBP1A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mybbp1a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYBBP1A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mybbp1a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mybbp1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYBBP1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mybbp1a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYBBP1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYBBP1A dans les cellules tumorales présentant une expression de Mybbp1a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.