Mxi1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403155-ACT

ヒトMXI1は、bHLH（塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス）ロイシンジッパー型の転写抑制因子Mxi1をコードしており、MAXとヘテロ二量体を形成してMYCにより駆動される遺伝子発現プログラムに拮抗します。コリプレッサー複合体をE-box配列を含む制御領域へリクルートすることで、Mxi1は細胞増殖の抑制、細胞周期進行の調節、分化に伴う転写状態の維持に寄与します。MXI1の活性はMYC/MAXネットワークのシグナル伝達や、細胞の増殖・ストレス応答を形作るクロマチン依存的な転写制御機構とも交差します。MXI1の発現や機能の破綻はMYC経路の出力変化と関連づけられており、転写バランスが細胞運命に影響するがん生物学などの文脈で頻繁に検討されています。

Mxi1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MXI1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mxi1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MXI1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMXI1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mxi1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMXI1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMxi1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMXI1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMxi1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。