Plásmido CRISPR de Activación (h) Muskelin: sc-409182-ACT

El MKLN1 humano codifica muskelina, una proteína andamiaje multidominio implicada en la organización de la arquitectura del citoesqueleto y en la coordinación del tráfico intracelular. La muskelina se ha vinculado a procesos dependientes de actina, al transporte de vesículas y al recambio regulado de complejos proteicos, lo que contribuye al control espacial de la señalización y a la dinámica de los receptores. A través de estas funciones, MKLN1 puede influir en vías que regulan la adhesión celular, la migración y la proteostasis, las cuales se remodelan con frecuencia en la biología del cáncer y en contextos neurobiológicos. La expresión desregulada o las alteraciones en redes asociadas a muskelina se han estudiado por sus efectos sobre la morfología celular, las respuestas al estrés y la homeostasis de la señalización en modelos relevantes para enfermedades.

Muskelin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MKLN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Muskelin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MKLN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MKLN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Muskelin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MKLN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Muskelin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Muskelin en células tumorales con expresión de MKLN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.