Plásmido CRISPR de Activación (h) MuRF1: sc-400797-ACT

TRIM63 codifica MuRF1, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING finger específica del músculo que promueve la degradación selectiva, mediada por el proteasoma, de proteínas sarcoméricas y miofibrilares durante la remodelación del músculo esquelético y cardíaco. MuRF1 integra la actividad del sistema ubiquitina–proteasoma con la señalización sensible al estrés, incluidos programas transcripcionales dependientes de FOXO y vías catabólicas que regulan la homeostasis proteica y la función contráctil. La alteración de la expresión de TRIM63/MuRF1 se asocia con fenotipos de atrofia muscular y con procesos de remodelación observados en contextos de enfermedad crónica y desuso, y con frecuencia se estudia como un efector molecular del desequilibrio de la proteostasis. Como regulador de la estabilidad de las miofibrillas, MuRF1 ofrece una vía mecanística para investigar rutas que conectan el estrés metabólico, la inflamación y la adaptación estructural del músculo.

MuRF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRIM63 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MuRF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRIM63 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRIM63, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MuRF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRIM63 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MuRF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MuRF1 en células tumorales con expresión de TRIM63 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.