Plásmido Doble Nickase (m) mucolipin 1: sc-430117-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)mucolipin 1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa mucolipin 1 (m) y el plásmido de doble nickasa mucolipin 1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Mcoln1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) mucolipin 1 | sc-430117-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) mucolipin 1 | sc-430117-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mcoln1 codifica mucolipina 1 (TRPML1), un canal catiónico endolisosomal permeable al Ca2+ que regula la homeostasis iónica lisosomal, el tráfico de membranas y la dinámica de fusión–fisión. Al acoplar la liberación de Ca2+ luminal con efectores aguas abajo, TRPML1 sostiene el flujo de la vía de autofagia–lisosoma, el procesamiento de la carga endocítica y la exocitosis lisosomal, importantes para la depuración celular y la detección de nutrientes. La señalización dependiente de Mcoln1 se intersecta con las respuestas al estrés lisosomal y con programas de transporte vesicular que influyen en el control de calidad mitocondrial y la señalización inflamatoria. La alteración de la función de TRPML1 se asocia con patología por almacenamiento lisosomal y fenotipos neurodegenerativos, lo que convierte a Mcoln1 en una diana clave para estudios mecanísticos de la disfunción endolisosomal en modelos murinos.
mucolipin 1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mcoln1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mcoln1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mcoln1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mcoln1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.