Plásmido Doble Nickase (h) mucolipin 1: sc-403931-NIC

MCOLN1 codifica la mucolipina 1 (TRPML1), un canal catiónico permeable al Ca²⁺ localizado en endolisosomas que regula el tráfico de membranas, la reformación de lisosomas y el flujo autofagia-lisosoma. La liberación de Ca²⁺ mediada por TRPML1 coordina eventos de fusión y fisión de vesículas e influye en la homeostasis iónica lisosomal, con impacto en la detección de nutrientes y en vías de adaptación al estrés, incluida la señalización de mTORC1. La alteración de MCOLN1 perturba el procesamiento del cargo endocítico y los mecanismos de depuración celular, vinculando la disfunción lisosomal con la neurodegeneración y con la biología más amplia de los trastornos de almacenamiento lisosomal. Como regulador nodal del control de calidad de los orgánulos, MCOLN1 se estudia con frecuencia en modelos de defectos del tráfico intracelular, respuestas al estrés oxidativo y señalización inmunitaria innata.

mucolipin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCOLN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCOLN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCOLN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCOLN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.