Plásmido Doble Nickase (m) Mucin 5AC/MUC5AC: sc-421752-NIC

Muc5ac codifica la mucina formadora de gel Mucina 5AC/MUC5AC, una glucoproteína secretada fuertemente O‑glicosilada que constituye un componente estructural principal de la barrera mucosa de las vías respiratorias y del tracto gastrointestinal en los epitelios de ratón. Su expresión regulada favorece el aclaramiento mucociliar, la hidratación epitelial y la defensa innata al modular las propiedades viscoelásticas del moco y limitar el contacto de los patógenos con la superficie celular. Muc5ac se induce durante la diferenciación epitelial y la remodelación inflamatoria mediante programas sensibles a citocinas y al estrés, incluida la señalización EGFR/MAPK y la metaplasia de células caliciformes impulsada por IL‑13–STAT6. La producción desregulada de Muc5ac y las alteraciones en la glicosilación de mucinas se asocian con la obstrucción por tapones de moco y la inflamación crónica en modelos de enfermedad respiratoria, así como con cambios en la barrera epitelial en patología gastrointestinal, por lo que es una lectura habitual en estudios de hipersecreción de las vías respiratorias e inmunidad mucosal.

Mucin 5AC/MUC5AC El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Muc5ac en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Muc5ac. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Muc5ac. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Muc5ac alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.