Mucin 5AC/MUC5AC Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421752-NIC

Muc5ac codifica a mucina formadora de gel Mucin 5AC/MUC5AC, uma glicoproteína secretada fortemente O-glicosilada que é um importante componente estrutural da barreira de muco das vias aéreas e do trato gastrointestinal nos epitélios de camundongo. Sua expressão regulada sustenta a depuração mucociliar, a hidratação epitelial e a defesa inata ao moldar as propriedades viscoelásticas do muco e limitar o contato de patógenos com a superfície celular. Muc5ac é induzido durante a diferenciação epitelial e o remodelamento inflamatório por meio de programas responsivos a citocinas e ao estresse, incluindo a sinalização EGFR/MAPK e a metaplasia de células caliciformes dirigida pelo eixo IL-13–STAT6. A produção desregulada de Muc5ac e alterações na glicosilação das mucinas estão associadas à obstrução por muco e à inflamação crônica em modelos de doenças respiratórias, bem como a mudanças na barreira epitelial em patologias gastrointestinais, tornando-o um desfecho frequentemente utilizado em estudos de hipersecreção das vias aéreas e imunidade mucosa.

Mucin 5AC/MUC5AC O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Muc5ac em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Muc5ac. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Muc5ac. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Muc5ac interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.