Plásmido Doble Nickase (h) Mucin 4/MUC4: sc-400329-NIC

MUC4 codifica la mucina 4, una glucoproteína de alto peso molecular asociada a la membrana que contribuye a la función de barrera epitelial, la lubricación y la formación del glicocálix mediante una extensa O‑glicosilación. Como mucina de superficie celular, MUC4 participa en interacciones célula–célula y célula–matriz, y puede modular redes de señalización de receptores, incluidas las vías asociadas a la familia ERBB, influyendo en la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La expresión alterada de MUC4 y la remodelación de sus glicoformas se estudian con frecuencia en el contexto de la transformación epitelial, fenotipos asociados a la invasión y mecanismos de evasión inmunitaria en interfaces mucosas. Estas características hacen de MUC4 un marcador útil y un nodo funcional para investigar la biología de las mucinas, la homeostasis epitelial y la interconexión de vías de señalización en modelos relevantes para enfermedades.

Mucin 4/MUC4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUC4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUC4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUC4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUC4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.