Plásmido CRISPR de Activación (h) Mucin 4/MUC4: sc-400329-ACT

MUC4 codifica la mucina 4, una glicoproteína transmembrana de alto peso molecular que contribuye a la función de barrera epitelial, la lubricación y la señalización en la superficie celular a través de su dominio extracelular fuertemente O‑glicosilado. La mucina 4 participa en interacciones célula–célula y célula–matriz y puede modular la señalización de receptores tirosina cinasa, incluidas las vías asociadas a ERBB2/HER2 que influyen en la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. La alteración de la expresión de MUC4 y de los patrones de sus glicoformas se asocia con adhesión desregulada, remodelación epitelial y microambientes inflamatorios en múltiples enfermedades derivadas de epitelios. Debido a que MUC4 afecta la arquitectura de la superficie y la salida de señalización, se estudia ampliamente en modelos de biología mucosa, polaridad epitelial y fenotipos asociados a tumores.

Mucin 4/MUC4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUC4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mucin 4/MUC4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUC4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUC4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mucin 4/MUC4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUC4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mucin 4/MUC4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mucin 4/MUC4 en células tumorales con expresión de MUC4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.