Plásmido CRISPR de Activación (h) Mucin 16/MUC16: sc-403050-ACT

MUC16 codifica la mucina 16, una mucina transmembrana de alto peso molecular, intensamente O‑glicosilada, que contribuye al glucocálix epitelial y a la función de barrera mucosa. A través de sus extensas repeticiones en tándem extracelulares y su cola citoplasmática, MUC16 modula las interacciones célula‑célula y célula‑matriz, afecta los programas de adhesión y migración, y puede influir en redes de señalización de receptores y en el reconocimiento inmunitario en la superficie celular. La expresión y la glicosilación alteradas de MUC16 se estudian ampliamente en el contexto de neoplasias epiteliales, donde se correlacionan con cambios en la invasión, el potencial metastásico y las interacciones con el microambiente tumoral. Por ello, MUC16 se utiliza con frecuencia como un nodo funcional para investigar la biología de las mucinas de superficie, los glicoepítopos y la señalización proximal a la membrana en modelos celulares humanos.

Mucin 16/MUC16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUC16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mucin 16/MUC16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUC16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUC16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mucin 16/MUC16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUC16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mucin 16/MUC16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mucin 16/MUC16 en células tumorales con expresión de MUC16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.